Novedades Laboratorio de Bioquímica Molecular Instituto A. Lanari Entrevista Dr Pablo Azurmendi

Hoy nos convoca la entrevista al Dr. Pablo Azurmendi a cargo del Laboratorio de Bioquímica Molecular, Servicio de Nefrología Experimental; componente de nuestro staff de profesionales bioquímicos del Instituto Lanari.


Recientemente, el IDIM Lanari incorporó un moderno termociclador con detección simultánea del producto, para la realización de reacción en cadena de polimerasa cuantitativa. El equipamiento adquirido es un Light Cycler 2.0 de Roche, el cual permite la amplificación, detección y cuantificación de ADN en tiempo real, mediante sensores que permite la lectura de distintos fluorocromos a distintas longitudes de onda. Posee una plataforma rápida, eficiente y reproducible de reacciones en cadena de polimerasa cuantitativa multiplex en paralelo, en tiempo real y de alto rendimiento, para la detección, caracterización y cuantificación de ácidos nucleicos. Estos análisis brindad información importante, tal como: identificación y cuantificación de diversos microorganismos patógenos, determinación de variantes genéticas con significado clínico de una enfermedad o evaluación de diferentes respuestas a fármacos.
1. ¿Que significa PCR cuantitativa o PCR en tiempo real? ¿Que muestra se necesita? La PCR cuantitativa (en inglés, quantitative polymerase chain reaction; qPCR o Q-PCR) o PCR en tiempo real (en inglés real time PCR; RT-qPCR) es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico (ADN) o cDNA de la retrotranscripción del acido ribonucleico (ARN).
La técnica utiliza la medición mediante sensores especiales de la intensidad de un fluoróforo a la longitud de onda apropiada, permitiendo dosar la tasa de generación de uno o más productos específicos.
La muestra necesaria esta relacionada con el objetivo de estudio en cuestión, pero sencillamente cualquier muestra que contenga ADN o ARN es factible para su análisis. Por ejemplo para cuantificar ADN de citomegalovirus y determinaciones de variantes genéticas, la muestra indicada es sangre con EDTA, en condiciones de esterilidad para evitar contaminaciones. Sin embargo, otros materiales son aptos para el procesamiento, como saliva, muestras de tejido, etc.
2. ¿Que información brinda? ¿El equipo es operador dependiente? y la interpretación de resultados? La información más importante que proporciona la qPCR es la cuantificación a medida que se forma el producto de amplificación, lo cual genera una técnica rápida, eficaz y totalmente automatizada en la detección y cuantificación de ácidos nucleicos.
El equipo no es operador dependiente, pero para el manejo y procesamiento de muestras es necesario una capacitación específica, además de un amplio conocimiento para la interpretación de los resultados, lo cual requiere personal altamente calificado. 3. Que enfermedades podrían diagnosticarse? La utilización de la qPCR permite el estudio de una extensa lista de enfermedades que podrían diagnosticarse y/o complementar los estudios para tal fin. Pero es verdad que la metodología implementada tiene altos costos por lo que es necesario acotar su uso en función de las necesidades de cada institución. En nuestro caso particular, iniciamos el trabajo realizando la cuantificación de ADN de citomegalovirus, principalmente para pacientes trasplantados renales. También puede identificarse otros patógenos virales, bacterias, y analizar la farmacorresistencia de los mismos. Otro uso que en este momento estamos desarrollando es la genotificación de las variantes del gen de la Apolipoproteina E (APOE) como factor de riesgo en la enfermedad de Alzheimer, así como las variantes del gen Citocromo P450 2C9 (CYP2C9) y del Complejo de la epóxidorreductasa de la vitamina E (VCORK1) para el ajuste de dosis de los anticoagulantes de derivados cumarínicos (warfarina y acenocumarol).
Como este es un inicio de las actividades de un servicio nuevo, estamos coordinando con el resto de las áreas de la institución para incluir otras determinaciones en las diferentes especialidades.
4. ¿Cómo debería solicitarlo el médico? El medico debería solicitarlo como carga viral o qPCR para citomegalovirus; y en el caso de genotipificación debe solicitarse como tal, teniendo en cuenta que en un principio deben coordinar con el servicio las consideraciones para cada estudio. 5. ¿Cuál es el desafío que debe afrontar esta nueva metodología? La metodología es muy robusta, pero como toda técnica posee sus puntos débiles, como por ejemplo la contaminación, la cual puede generar obtención de resultados erróneos si no se tienen las debidas precauciones.
Por otro lado actualmente es una tecnología costosa, que involucra no solo el equipamiento necesario, si no también una inversión en la infraestructura edilicia que se requiere para montar un servicio de biología molecular, que en un futuro cercano será una de las herramientas mas importantes en el diagnóstico, tratamiento y seguimiento de las enfermedades.


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